本文是学习GB-T 18640-2017 家畜日本血吸虫病诊断技术. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了家畜(牛、羊、猪、犬和马属动物)日本血吸虫病临床诊断、间接血凝试验(IHA)、 病 原
学诊断的方法和程序。
本标准适用于家畜(牛、羊、猪、犬和马属动物)日本血吸虫病的诊断、检疫、流行病学调查和防治效
果评价。
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
日本血吸虫病 schistosomiasis japonica
由日本血吸虫感染人和动物所引起的疾病。
2.2
中间宿主 intermediate host
寄生虫在无性繁殖阶段所寄生的动物。
2.3
疫水 infected water
被细菌、病毒等微生物以及寄生虫所污染的，具有传染性的水源。
注：本标准中专指含有日本血吸虫尾蚴的水。
2.4
成 虫 adult worm
性发育成熟的虫体。
2.5
虫卵 egg
雌虫和雄虫交配后产的卵。
2.6
毛蚴 myracidium
从吸虫虫卵中孵化出的幼虫。
2.7
毛蚴孵化 miracidium hatching
虫卵转变成毛蚴的过程。
2.8
虫卵可溶性抗原 soluble egg antigen
虫卵裂解后释放的溶解于生理盐水的抗原分子。
2.9
间接血凝试验 indirect hemagglutination
以红细胞作为载体的间接凝集试验。
GB/T 18640—2017
下列缩略语适用于本文件。
IHA: 间接血凝试验(indirect hemagglutination)
SEA: 日本血吸虫虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen)
竹筷、40目～80目的铜筛滤杯、260目的尼龙筛兜、500 mL
量杯、粪桶、放大镜、显微镜、吸管、载玻
片、盖玻片、取暖炉、水温计、盆、水缸、水桶、剪刀、闹钟、天平、脱脂棉、300
mL～500 mL 长颈平底烧瓶
或带顶管的塑料杯(500 mL～1000 mL)或500 mL 盐水瓶及与瓶口相配的10 mL
试管、家畜解剖刀
具、手术剪、止血钳、内径5 mm～10mm
的铜管或玻璃管以及与此相匹配的橡皮管、96孔 V 型微孔血
凝板(孔底角90°)、移液器及吸头、定性滤纸等。
自来水、河水、池水、井水等，pH
值6.8～7.2。处理方法如下：自来水，在盛器中存放8 h 以上；河
水、池水、井水等，加温至60℃以上，冷却；混浊的水，每50 L 水加明矾3 g～5g,
充分搅拌，澄清。
日本血吸虫病IHA 诊断液为日本血吸虫虫卵可溶性抗原 SEA
致敏绵羊红细胞或人"O" 型红细 胞，效价≥64。标准阴性血清，IHA
效价≤4,标准阳性血清，IHA 效价≥1280。生理盐水。市售或由 指定单位提供。
5.1 组织捣碎机(或高速分散均质机)。
根据血吸虫病流行病学特点和临床症状进行诊断。
容易感染日本血吸虫的家畜主要有牛、羊、猪、犬以及马属动物。中间宿主为钉螺。流行区主要分
布于有钉螺孳生的长江以南十二个省(市、自治区);家畜因接触疫水而感染，大多数疫区的感染季节为
3月～11月。
6.1.3.1 黄牛和奶牛主要临床症状
黄牛和奶牛主要临床症状如下：
GB/T 18640—2017
—急性型症状：多见于重度感染小牛，偶见于成年黄牛。典型症状为体温升高达40
℃以上，消
瘦，被毛粗乱，拉稀，便血，生长停滞，黄牛使役力下降，奶牛产奶量下降，母畜不孕或流产。特
别严重者肛门括约肌松弛，直肠外翻、疼痛，食欲不振，步态摇摆、久卧不起，呼吸缓慢，最后衰
竭而死亡。
——慢性型症状：消瘦，畏寒，被毛粗乱，拉稀，偶有便血，精神不振。轻度感染者可无症状。
6.1.3.2 绵羊和山羊主要临床症状
食欲减退，消瘦，腹泻，下痢，贫血，精神不振。严重者至衰竭而死亡。
6.1.3.3 水牛、马属动物、猪和犬主要临床症状
一般没有明显临床症状。重度感染者有腹泻，下痢，贫血，消瘦，被毛粗乱等症状。
7.1.1 血清：颈静脉或耳缘静脉采血1 mL～2mL,
静置自然析出血清或待血液凝固后3000 r/min~
5000 r/min离心10 min,分离血清，4℃保存。
7.1.2
血纸：在耳缘静脉采血5滴～10滴，滴于定性滤纸，于阴凉处晾干，放在干净白纸中，2
d 内检测。 也可保存于4℃冰箱1个月内检测。
7.2.1 剪下1cm×1.2cm 血纸，加200μL 生理盐水，浸泡10
min,为血纸浸泡液。取100 μL 用生理盐
水作1:2稀释。
7.2.2 血清稀释：用生理盐水将血清作1:10和1:20稀释。
7.2.3
加样：取1:10和1:20稀释的血清或血纸浸泡液及1:2稀释的血纸浸泡液样品各25μL,加
入96孔 V
型微孔血凝板样品孔，每个稀释度样品加2孔。每块血凝板需设标准阳性血清、标准阴性血
清和生理盐水对照。
7.2.4 加诊断液：每孔加25 μL 诊断液，震荡混匀。
7.2.5 孵育：室温孵育1 h～2h, 然后观察并判定结果。
判定方法如下：
——红细胞完全不凝集，即全部下沉到孔底中央，形成周缘整齐、紧密红色圆点，为阴性(一);
——红细胞25%以下凝集，即75%以上沉于孔底中央，形成较阴性小的红色圆点，周围有少量凝集
红细胞，为弱阳性(+);
—
红细胞约50%凝集，即约半数沉于孔底中央，形成更小红色圆点，周围有一层淡红色凝集红细
胞，为阳性(十十):
-红细胞全部凝集，均匀地分散于孔底，形成淡红色薄层，为强阳性(十十十)。
7.3.2.1
试验成立条件：当阳性对照血清全部为"++"以上阳性、阴性对照血清及生理盐水各孔均为
GB/T 18640—2017
"一"时，试验成立，否则试验不成立，需检查原因，重新试验。
7.3.2.2
在4个试验孔中有一孔出现"+"以上阳性时，被检血清判为阳性。
8.1.1.1
家畜剖杀后，从速剥皮，仰卧，剖开胸腔和腹腔，去胸骨。分开左右肺，结扎下腔静脉。
8.1.1.2
找出胸主动脉，沿血管平行方向开口，从离心方向插入带橡皮管的玻璃接管或铜管，并用棉线
扎紧固定。橡皮管的另一端接自来水龙头。
8.1.1.3
分离肾脏，将进出肾脏的动、静脉结扎；同时将左右两侧的髂动脉和髂静脉结扎。
8.1.1.4
分离肝门静脉，向肝一端用棉线扎紧，离肝一端沿血管平行方向开口，插入带橡皮管的玻璃接
管并固定。橡皮管的另一端接40目铜筛。
8.1.1.5
开启自来水并逐步加大水压。同时翻动肠和肠系膜以利于血管内水的流动。当橡皮管的另一
端出水无血色时，关闭龙头。
8.1.1.6
检查铜筛内是否有虫体。如无虫体，应仔细检查肠系膜静脉和直肠痔静脉是否有虫体。
8.1.1.7
将收集到的虫体置于解剖镜下观察。成虫形态特征为：雌雄异体，
一般呈合抱状态；口、腹吸盘 位于虫体前端；雄虫大小为(10 mm～22
mm)×(0.50 mm～0.55 mm),乳白色，腹吸盘以下虫体由两侧
向腹面卷曲，呈圆柱形；雌虫圆柱形，前细后粗，大小为(15 mm～26 mm)×(0.14
mm～0.28 mm),肠管 内含较多的红细胞消化后残留的物质而呈灰褐色。
8.1.2.1
取出肝脏，肉眼观察。如发现肝脏表面白色结节，用眼科剪剪取结节，置载玻片上。每片可置
4个～5个结节。
8.1.2.2
取另一载玻片置结节之上，压紧，用胶布或橡皮筋固定。
8.1.2.3
将压好的载玻片置于低倍显微镜(10倍或40倍物镜)下检查。虫卵形态特征为淡黄色，椭圆
形，卵壳均匀，无小卵盖，卵壳一侧有一小棘，大小为(74μm～106μm)×(55μm～80
μm)。
8.1.3.1 取肝组织10 g～20g, 剪碎，加入20 mL
孵化用水，用组织捣碎机(或高速分散均质机)
5000 r/min～10000 r/min粉 碎 1 min～2 min。
8.1.3.2 加入100 mL
孵化用水，混匀，均匀分成4份，分别进行毛蚴孵化。
8.1.3.3 孵化条件及毛蚴观察同8.2.3和8.2.4。
8.2.1.1 采集新排出的粪便或直接从直肠中采取。
8.2.1.2 采粪量：牛、马属动物200 g, 猪100 g,
羊和犬粪40 g, 每份粪样需附上填好的送粪卡，送粪卡记
录内容包括：采集地点、饲养员或畜主姓名、畜别、畜名或畜号、性别、年龄、妊娠状况和采粪日期。
8.2.1.3 于采粪当天送到检验室。
GB/T 18640—2017
8.2.2.1
将每头家畜的粪样分3份，进行平行检测。每份检测粪量为：牛和马属动物50 g,
猪20 g, 羊、 犬10 g。
8.2.2.2
牛、猪和马属动物粪样，根据实际情况选用下列方法中的一种处理：
——将粪样装入尼龙筛兜中，用自来水在搅拌条件下(用竹筷)淘洗至滤液清澈，沥干。
—将粪样倒入铜筛中，铜筛置量杯上部，加孵化用水，淹没粪样，用竹筷搅拌至稀浆状，捞出铜筛，
沥干后再次浸入，搅拌，如此3次。将量杯中细渣及粪水一并倒入尼龙兜中，用水冲淘洗至滤
液清澈。
——将粪样倒入铜筛中，铜筛置塑料杯(带顶管塑料杯去盖和顶管)上部，加孵化用水淹没粪样，用
竹筷搅拌至稀浆状，捞出铜筛，沥干后再次浸入，搅拌，如此3次。将塑料杯中粪样沉淀
15 mim 左右，倒去上层清夜的三分之二。
将粪样置于量杯或带顶管塑料杯中，加少量孵化用水搅匀，再加满孵化用水，沉淀15
mim 左
右，倒去上层清液的三分之一至二分之一。
8.2.2.3 羊粪：无需处理。
8.2.2.4
犬粪：将粪样置于铜筛滤杯，铜筛滤杯置于尼龙筛兜之上，用自来水冲淋并用竹筷搅拌至滤液
清澈。
选用下列方法之一进行孵化，孵化条件为20℃~30℃、光照(日光或灯光):
——长颈平底烧瓶孵化法：将上述处理后粪样装入长颈平底烧瓶，加25℃左右孵化用水至瓶口下
4 cm～5 cm处，在水面加1 cm～2cm
厚的松软脱脂棉，补加孵化用水至高出脱脂棉约3 cm。
——塑料杯顶管孵化法：将上述处理后粪样装入专用塑料杯，加孵化用水至杯口。盖上中间有孔的
塑料盖，加满孵化用水。将顶管注孵化用水至管口1cm～2
cm,管口蒙一层薄薄的脱脂棉，倒
插入塑料盖孔中。
——顶管孵化法：将上述处理后粪样装入500 mL
盐水瓶，加满25℃左右孵化用水，将试管开口端
外围缠绕一定胶布(能插入盐水瓶瓶口且不漏水),试管内加孵化用水至管口1
cm～2 cm,管
口蒙一层薄薄的脱脂棉，迅速倒插入盐水瓶瓶口。
8.2.4.1 分别在孵育1 h 、3h 和 5 h,
进行观察。观察时，将孵化杯(瓶)向着光源并衬以黑色背景。每
个样品每次连续观察2 min
以上。如有怀疑，可用滴管将毛蚴吸出，置显微镜进一步观察。
8.2.4.2
血吸虫毛蚴肉眼观察特征：为针尖大小、灰白色、梭形、折光性强，在近水面作水平或斜向直线
折返运动。
8.2.4.3
血吸虫毛蚴显微观察特征：前部宽，中间有个顶突，两侧对称，后渐窄，周身有纤毛。
有流行病学接触史的动物，出现6.1.2所述临床症状或间接血凝试验(IHA)
呈阳性。
8.2.4.2 和[8.2.4.3](https://8.2.4.3
GB/T 18640—2017
1个～5个毛蚴为+,6个～10个毛蚴为++,11个～20个毛蚴为+++,21个以上毛蚴为十十十十。
8.1.1.7 所述特征的虫体，或肝组织压片发现[8.1.2.3](https://8.1.2.3
8.2.4.2 和[8.2.4.3](https://8.2.4.3
8.2.4.2 和[8.2.4.3](https://8.2.4.3
8.1.1.7 所述特征的虫体，肝组织压片未发现[8.1.2.3](https://8.1.2.3
8.2.4.2 和[8.2.4.3](https://8.2.4.3
GB/T 18640—2017
更多内容 可以 GB-T 18640-2017 家畜日本血吸虫病诊断技术. 进一步学习